风起“云”涌
——沃特世18种邻苯二甲酸盐UPLC/MS/MS分析解决方案
 

　　近日，台湾媒体报道了起云剂遭受增塑剂污染的事件，导致食品安全检测市场顿时风起“云”涌，邻苯二甲酸盐的检测再度成为人们关注的焦点。

　　起云剂(又名浑浊剂、乳浊剂、增浊剂)也就是我们常说的乳化稳定剂。主要应用于饮料和奶类制品。在饮料中使用，有助于释放与保留果汁饮料的香气，包埋果汁饮料的异味、杂味，也能增强果汁饮料口感的润滑性、厚实感，尤其是有效改良果汁饮料的天然感观，显著提高果汁饮料的品质质量。起云剂的主要成分为风味油、单体香油、增重剂、乳化稳定剂、乳化剂、水，它本身对人体并没有危害，本次事件的发生是由于少数起云剂生产厂家为降低成本使用在食品中禁用的增塑剂类物质邻苯二甲酸盐代替原本应该使用的棕榈油，从而引发了食品安全事件。

　　确保食品添加剂或者食品本身是否含有邻苯二甲酸盐类物质的一个途径就是使用分析手段对其进行检测。

　　我们常说的邻苯二甲酸盐是一类结构比较相似的化合物，在2011年6月，中国卫生部将17种邻苯二甲酸盐类物质列入《食品中可能违法添加的非食用物质和易滥用的食品添加剂名单(第六批)》名单，如下：

　　邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)、

　　邻苯二甲酸二异壬酯(DINP)、

　　邻苯二甲酸二苯酯(DPP)、

　　邻苯二甲酸二甲酯(DMP)、

　　邻苯二甲酸二乙酯(DEP)、

　　邻苯二甲酸二丁酯(DBP)、

　　邻苯二甲酸二戊酯(DPP)、

　　邻苯二甲酸二己酯(DHXP)、

　　邻苯二甲酸二壬酯(DNP)、

　　邻苯二甲酸二异丁酯(DIBP)、

　　邻苯二甲酸二环己酯(DCHP)、

　　邻苯二甲酸二正辛酯(DNOP)、

　　邻苯二甲酸丁基苄基酯(BBP)、

　　邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯(DMEP)、

　　邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯(DEEP)、

　　邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯(DBEP)、

　　邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯(BMPP)

　　本方法介绍了两种基于沃特世超高效液相色谱技术(UPLC技术)分析18种(含台湾FDA要求)邻苯二甲酸盐的方法，方法一为采用沃特世超高效液相色谱质谱联用技术(UPLC/MS/MS)，该方法具有分析速度快，灵敏度高的特点。适用于实验室拥有质谱系统并追求检测灵敏度的用户。方法二为采用沃特世超高效液相色谱系统和二极管阵列检测器(UPLC/PDA)分析方法，适用于暂时还不具有质谱系统的用户。

　　样品提取(台湾FDA方法)：

　　取混匀后样品1g，精确称量，置于50ml容量瓶，加入约45ml 甲醇，超声波震荡30min, 冷却后用MeOH 定容到50ml。静置后，取上部溶液约5ml置于离心管中，于 3500rpm离心10min,取上清液装瓶,待测。对于基质比较复杂的样品，对于提取后的样品可以采用进一步的固相萃取净化手段。

 

【方法一：UPLC/MS/MS方法】

实验条件

A．UPLC 条件
LC系统：     ACQUITY UPLC H Class系统
色谱柱：   ACQUITY UPLC HSS C18，1.7um，2.1X100mm，
流动相A：0.1%FA水溶液
流动相B：乙腈
流速：0.4ml/min
梯度洗脱:   梯度表

 

时间(分)	流速 (ml/min)	A (%)	B (%)	曲线
0.00	0.40	65	35	*
1.50	0.40	25	75	6
2.00	0.40	0	100	6
6.20	0.40	0	100	6
7.50	0.40	65	35	1

进样体积：10uL
柱温：35℃,   
样品温度：    10℃
强洗溶剂：    ACN 
弱洗溶剂：    H2O :ACN= 95:5
运行时间：    7.5分钟

B. MS条件:
系统：          ACQUITY UPLC TQD
离子化模式：ESI+
电离电压：   3.2KV
离子源温度：120℃
脱溶剂气温度：  400℃
脱溶剂气流量:   650L/Hr

18种邻苯二甲酸盐分析结果（浓度：10ppb）
（DMP、DMEP、DEEP、DEP、DPhP、DEHP、BBP、DIBP、DBP、DBEP、DPP、DCHP、BMPP、DHXP、DNOP、DINP、DNP、DIDP）


部分MRM 通道:


【方法二：UPLC/PDA方法】

A．UPLC/PDA 条件
仪器系统：Waters UPLC H-Class/PDA 
色谱柱：ACQUITY UPLC HSS C18 (1.7um, 2.1×100mm)
波 长：225nm，
柱 温：45℃，

流 速：0.4mL/min
流动相：A-水，B-乙腈，进行梯度洗脱

18种邻苯二甲酸盐色谱分析结果如下图所示
 

保留时间（min）	中文名称	英文名称	峰序列
4.482	邻苯二甲酸二甲酯	DMP	1
4.896	邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯	DMEP	2
8.483	邻苯二甲酸二乙酯	DEP	3
8.622	邻苯二甲酸二（2-乙氧基）乙酯	DEEP	4
14.176	邻苯二甲酸二（2-丙基庚）酯	DPHP	5
15.137	邻苯二甲酸丁基苄基酯	BBP	6
15.311	邻苯二甲酸二异丁酯	DIBP	7
15.464	邻苯二甲酸二丁酯	DBP	8
15.616	邻苯二甲酸二-（3-丁氧基）乙酯	DBEP	9
17.894	邻苯二甲酸二戊酯	DPP	10
18.013	邻苯二甲酸二环己酯	DCHP	11
19.416	邻苯二甲酸二（4-甲基-2戊基）酯	DMPP	12
19.929	邻苯二甲酸二己酯	DHXP	13
22.644	邻苯二甲酸二（2-乙基）己酯	DEHP	14
23.103	邻苯二甲酸二正辛酯	DNOP	15
23.727	邻苯二甲酸二异壬酯	DINP	16
24.335	邻苯二甲酸二壬酯	DNP	17
24.570	邻苯二甲酸二异癸酯	DIDP	18

饮料基质1加标与空白结果



饮料基质2加标与空白结果



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